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刻畫十八世紀中法藝術交會－中國風設計圖冊研究

為了解決合利他命f50的問題，作者侯米玲 這樣論述：

十八世紀初中期在歐洲興起的中國風流行，其中作為工匠設計參考的中國風設計圖冊，是促成流行的重要因素之一。中國風設計圖冊往往是設計大師精心之作，不僅具有藝術價值，在當時也是一種奢華消費品及重要收藏品。為了型塑出中國風格，往往會參考當時皇家及貴族所收藏的中國版畫及中國外銷器物。本論文以「刻畫十八世紀中法藝術交會－中國風設計圖冊研究」為題，觀察與討論的面向包括法國十六到十八世紀以來，設計圖冊的風格演變，試著以宏觀的視野去了解十八世紀初中期盛行的中國風設計圖冊，是如何以傳承自十七世紀以來的主題，經由融合中國或東方元素，去創造出新的圖像。並試著釐清圖冊中所參考的中國圖像之來源。再以物質文化研究的角度切入

，將中國風設計圖冊視為手工藝術品，從生產與消費兩端，去建立起它的完整「生命履歷」。在生產方面，將探討其如何被製作？此牽涉到法國出版業的特權制度、出版商的特殊群聚場所，以及畫家、版畫家及出版商之間的合作關係。並有系統的介紹設計圖冊如何被運用在工藝品及室內裝飾上。在消費方面，將釐清贊助者或消費者對圖冊生產的品味影響、圖冊如何及在何處被購買與收藏？以及如何滿足市場、政治權力、社會文化等方面之需求。最後以跨文化消費角度，探討當時歐洲的圖書和圖冊是如何透過翻譯成為知識的來源、並檢視這些中國風設計圖冊如何從法國向歐洲主要國家傳播、協助各類工匠們製作中國風的裝飾及器物？設計師如何跨域製作？各國如何轉譯這些來

自法國藝術家的設計圖等。

胃幽門桿菌正常型及突變型單股核酸結合蛋白之功能分析

為了解決合利他命f50的問題，作者黃禮堃 這樣論述：

單股核酸結合蛋白(SSB)在許多有關DNA的代謝中扮演著十分重要的角色，像是DNA複製、修補、重組的機制等。胃幽門桿菌(HP)的基因HP1245被預測為SSB。但到目前為止，卻尚未有相關的論文或研究被發表。過去，我們實驗室已分別建構了來自於HP全長含179個胺基酸的單股核酸結合蛋白(HP1245) ，去除C端含134個胺基酸的tm-HP1245 (1~134) 以及去除C端的4支點突變株(F37A， F50A， F56A， F84A)。本研究中，利用基礎分生技術及可獲得的載體，分別建構了全長含179個胺基酸的4支點突變的pQE30載體，轉殖到SG13009 大腸桿菌系統裡， 可分別表現不同轉

殖SSB蛋白質。另外，也建構含有EcoSSB的表現用pQE30載體，轉殖後，也能表現EcoSSB在相同的大腸桿菌系統。由重組基因 (recombinant DNA)方式 新配製之各種SSB之功能異同檢查，在本論文研究中以(1) 螢光檢查滴定法 (定量SSB加上含600-1200 鹼基的小牛胸腺單股DNA片段) (2) 電泳位移檢定法 (SSB加上定量單股M13mp18質体DNA) 以及 (3)表面電漿共振檢測法(SSB 加上生物晶片上定量生物素(Biotin)標記的單股PolydT35 三種方法來分別測量其SSB結合單股核酸的活性。 螢光檢查滴定法藉由測量SSB結合ssDNA時，其表面的色氨

酸(trptophan)在295 nm波長激發後所放出348 nm波長的螢光被抑制的程度，來計算一個參數Napp值，以了解纏繞一個SSB所需的核酸長度，或結合一個SSB所需的空間。在高塩(300 mM NaCl)時，HP1245的Napp參數值為 36+2 核苷酸(NT) / SSB-四聚體(tetramer)，遠短於EcoSSB 所得之 Napp參數值 (61+4 NT/tetramer)。而纏繞一個tmHP1245 (1~134) SSB所需的核酸長度 Napp為30+1核苷酸/四聚體- -為在本研究中測試之所有SSB族群裡，數值為最小的。此情形也出現在低塩條件 (10 mM NaCl)下

。由此可推測，去除Ｃ端對於ssDNA纏繞一個SSB四聚體有影響。 電泳位移檢定法藉由SSB結合單股M13mp18質體DNA，導致此質體DNA在洋菜膠體電泳中的移動速率減緩來測量SSB的活性。結果顯示: 無論在高塩或是低塩下，一個M13mp18最多可容納330~439個HP1245 SSB。此相似於由螢光檢查滴定法(fluorescence titration)所得的結果。然而，只有在低塩下，才觀察到結合蛋白SSB與單股M13mp18質體DNA有強力的協同作用。在高塩或是低塩下，tmHP1245 (1~134)結合蛋白，則需要較多數目(>594)的SSB 才能使一個M13mp18 DNA分子上

的SSB量達到飽和。此情形說明: HP1245 SSB去除Ｃ端會影響ssDNA在洋菜膠體電泳中的移動。檢測之質体DNA在洋菜膠體電泳中的移動速率減緩50%，所對應的每單位分子質體DNA所結合之SSB蛋白四聚體莫耳數比值(Molar Ratio, M.R.)， 對於正常野生型，突變型F37A， F50A， F56A， W84A 以及去除Ｃ端之tmHP1245 (1~134)之M.R.值分別為 46， 100， 62， 137， 140與168。表示正常野生型SSB具有最強的結合單股M13mp18質体DNA能力，其結合能力由大至小(或 相對於M.R.值由小至大)為: wild type 正常野生型

< F50A< F37A < F56A < W84A < 去除Ｃ端之tmHP1245 (1~134)。及時性的SPR測量 HP1245 與ssDNA的結合活性，藉由處理過Au, MUA，EDC/NHS，Streptavidin及5端Biotin修飾的35mer胸腺嘧碇的 生醫晶片，配合Biacore機器，在各個不同的實驗條件，來測量。實驗條件包括: (1) 固化Streptavitin的pH值 (Figure 11)、(2) 調整適當的ssDNA的量 (Figure 12)、(3) 測試動力學時所需的流速 (Figure13)、 (4) 再生 生醫晶片所用緩衝溶液(regeneration

buffer)的選擇 (Figure 14)、(5) SSB濃度、(6) 結合SSB-ssDNA (association)時間 (Figure16-17) 的控制。測試所得之最佳化結果為標準，再將最佳化實驗條件應用到量測 他種類SSB結合生物晶片上所固定之5端以生物素biotin修飾的(dT)35。所得的實驗訊號(response units, RU)，藉由BIAevalution 4.1版轉換為各種參數，例如，結合速率常數(ka)，解離速率常數(kd)，結合平衡常數 (KA)，解離平衡常數(KD) 藉此表SSB 的結合ssDNA時的親和力。 使用BiacoreX型的SPR (Figur

es 16-17)，所測量正常野生型HP1245 與ssDNA結合後之解離平衡常數KD值為0.16 nM，而以Biacore3000型的SPR (Figure 16-17)測量相同物種，得到之KD值為0.1 nM，此為測試不同的結合SSB-ssDNA 時間的結果，前者為2分鐘，後者5分鐘。相對於正常野生型HP1245，去除Ｃ端之後的tmHP1245 (1~134)結合ssDNA擁有較大的KD值，1.64 nM。此結果再次說明Ｃ端對HP1245結合ssDNA有重要的功能。C端對HP1245的重要性也同樣出現在螢光檢查滴定法及電泳位移檢定法的實驗結果中。 SPR量測不同種類之SSB結合ssDNA

所得之KD值由低到高排列如下: 最低的是正常型HP1245 (0.16 nM， Figure 16) ，其次為: F37A突變型 (1.6 nM， Figure 19) ，tmHP1245 (1~134) (1.64 nM， Figure 18)，W84A突變型 (2.3 nM， Figure 19)，F50A突變型 (3.06 nM， Figure 19)，最後為F56A突變型 (3.12 nM， Figure 19)。此結果顯示: 相對於正常型，4個突變型對結合ssDNA的影響- -有較低的KA (SSB與ssDNA有低的親和力)或是較高的KD (容易使SSB-ssDNA複合體分離)。本研

究結果也證實: SPR對於測試不同的HP1245 SSB能結合ssDNA之多寡，是一個很方便的技術。可使用微小体積與含量的SSB，ssDNA以量測 SSB結合ssDNA的結果。而且，由於W84A缺乏主要的螢光來源trptphan 84，所以無法以螢光檢查滴定法 測量。而EMSA則需要較大量的SSB與M13mp18 DNA才能進行運作。