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以卵母細胞分切技術產製之優質複製胚供建立豬胚胎幹細胞株

為了解決KHS Vitamin S的問題，作者施川立 這樣論述：

本試驗目的為改善複製胚之品質以提高複製豬與建立胚胎幹細胞之效率。試驗一測定抗壞血酸 (ascorbic acid, AA) 與曲古菌素A (Trichostatin A: TSA) 以及兩者共同 (TA) 添加對複製豬胚再程式化與發育之影響。各處理對囊胚率以AA處理組 (50 and 100 μg/mL) 之囊胚率高於對照組 (49.6% and 44.0% vs. 30.7%, P < 0.05)，TSA處理組 (30 and 40 nM) 兩者皆為60%，並顯著高於對照組 (29.4, P < 0.05)，而TA處理組之囊胚率則較AA組高 (58.9% vs. 43.5%, P < 0.

05)。TSA與TA處理之組蛋白 (acH3K9 and K14)乙醯化程度高於AA與對照組。經由TUNEL分析，AA與TA皆可降低囊胚之細胞凋亡率。試驗二則以胚聚合改善複製胚之品質，將兩個(2×)或三個胚(3×)聚合可提高囊胚率 (63.0% 與 73.6%)，而未經胚聚合之對照組僅35.1%。重組囊胚之總細胞數隨聚合之胚數量而不同 (P < 0.05)，最高為3×之126而最低為對照組之55。比較重組囊胚之內細胞團 (inner cell mass) 與總細胞數發現，2× (25.1%) 與3× (26.1%) 之重組胚總細胞數皆顯著高於對照組者(15.3%)。此外，細胞凋亡之比例在2×

(2.7%) 與3× (2.2%) 皆低於對照組 (4.7%)。最後將3×之重組囊胚轉殖入代理孕母後產下七頭仔豬。試驗三之目的在於以重組囊胚建立胚幹細胞株。將2×與3×之重組囊胚培養於飼養層細胞上後，貼盤率、擴增與初級細胞群落皆優於未經胚聚合之對照組 (P < 0.05)。飼養層細胞 (STO與 MEF) 與血清種類 (FBS 與 KSR) 對胚幹細胞之建立並無顯著影響。然而，將胚幹細胞培養於含KSR之培養液，則細胞增殖率下降、外觀異常甚至發生分化或死亡。胚幹細胞培養於α-MEM中(於前第三代)較於DMEM與DMEM/F12中之存活率高 (16.7%, 4.3% 及 6.8%)。此外，初級細胞

群落與第三代後仍存活之細胞量，以TSA處理組 (36.7%與26.7%) 顯著高於對照組(23.1%與11.5%)。綜合上述，添加ascorbic acid與TSA並配合不同處理可改善複製胚之發育潛能。胚聚合可提高複製胚之品質，經由細胞數量的增加、多能性基因表現與降低細胞凋亡基因之表現；將3×重組囊胚轉殖入母體亦可產下仔豬。雖然TSA與胚聚合可顯著改善複製豬胚品質與其胚幹細胞建立，但仍需更進一步的研究。