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猪隻表皮生長因子、轉形生長因子α及其嵌合體基因之選殖與表現

為了解決cbs全名的問題，作者邱后妍 這樣論述：

表皮生長因子(Epidermal growth factor, EGF)與轉形生長因子α(Transforming growth factorα, TGFα) 可藉由EGF受體之活化而成為一刺激原，有助於幼小動物建立胃腸黏膜細胞之屏障，而EGF與TGFα與受體間內化程度之不同，故本研究以N結構域和C結構互組產生嵌合體，用以比較EGF、TGFα及其嵌合體之生理活性。經RT-PCR反應選殖出豬EGF、TGFα及ETα嵌合體分子之基因，利用Pichia pastoris菌株配合pPIC9K表現系統生產重組蛋白，其次進行重組蛋白之定性與定量，並以BALB/c 3T3細胞比較其促細胞生長活性。當以發酵

槽培養經甲醇誘發表現之重組蛋白，並將發酵液上清液經蛋白質電泳分析，pEGF、pTGFα與pETα分別於6、5.7與5.7 kDa處發現蛋白質的色帶，再以西方墨漬法，更進一步證實其分別可受pEGF、pTGFα與pTGFα抗體辨識，而其重組蛋白之產量約在甲醇誘發後60小時達最高，其pEGF、pTGFα與pETα產量分別約達320、118與27 mg/L。而此三種重組蛋白皆具有促細胞生長之活性，其活性大小順序分別為pTGFα、pETα與pEGF。結果證實本研究室所開發之pEGF、pTGFα及其嵌合體皆有促進細胞生長之活性，而且其證實C結構域為提高細胞生長活性之所需。

木瓜乳汁幾丁質之純化與性質研究

為了解決cbs全名的問題，作者吳珮甄 這樣論述：

市售木瓜乳汁乾燥物所含幾丁質 (chitinase；EC 3.2.1.14)，經由緩衝液萃取、30-90％飽和度硫酸銨劃分、pAPMA-Sepharose吸著蛋白、Sephacryl S-100HR膠體過濾層析及DEAE-Sephacel離子交換層析等連續步驟純化，可使幾丁質純度提高26倍，並獲得14％ 酵素活性收率。純化之幾丁質水解乙二醇幾丁質(ethylene glycol chitin) 之最適pH值為6，最適溫度為60℃，Km值為1.49 mg/mL；水解羧甲基幾丁質 (CM-chitin-RBV) 之最適pH值為3，最適溫度為60-70℃。此外酵素亦可水解Micrococc

us lysodeikticus菌體，屬植物溶菌。然此幾丁質對幾丁聚醣(chitosan，84﹪去乙醯度)、幾丁三糖衍生物4-MU-GlcNAc3及對硝基苯-β-N-乙醯幾丁寡糖則不具水解活性。以SDS-PAGE電泳及幾丁質活性染色測得酵素之分子量為28.7 kDa，經製備式等電焦集電泳測得酵素pI值在pH 8~10間。重金屬離子Hg2+ (0.25 mM) 和Ag+ (0.25 mM) 以及化學修飾劑N-bromosuccimide (0.5 mM) 顯著抑制酵素活性。將純化之幾丁質於30至80℃水浴靜置1小時，結果顯示酵素於60℃以下頗穩定， 60℃以上則逐漸失去活性 (70℃保溫

1小時殘留40﹪活性)。以HPLC分析酵素水解產物，顯示純化之木瓜幾丁質可水解幾丁質聚合物及寡糖，屬內切型幾丁質。其水解幾丁質之產物為N-乙醯幾丁二糖、三糖及四糖，水解幾丁質寡糖之最低聚合度為N-乙醯幾丁三糖。